12月9日消息 - 来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室的研究人员以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板，通过RT-PCR技术扩增出HA基因，并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中，成功构建重组表达质粒pCI-HA，并通过免疫过氧化物酶单层细胞试验等对Balb/c小鼠的免疫效果评价。

    H1亚型猪流感是由隶属于正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒引起的猪呼吸道、生殖道以及免疫抑制疾病，是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾病之一。H1亚型流感在1918年就已经发生，然而第一株H1N1亚型SIVA/Swine/lowa/15/31(H1N1)于1931年才被分离并鉴定出来。回顾人类流感史，20世纪每次人类流感大流行的前后都有SI的发生和流行。近来报道1918年“西班牙流感”大流行的H1N1毒株与古典型H1N1SIV在基因和抗原方面极为相似。

    对于猪流感并没有真正的治疗方法，但是及时进行免疫接种能够提供有效保护。目前，SI的防制多采用灭活疫苗进行预防接种，并在控制SI的发生和蔓延中发挥了重要作用。H1N1亚型SI灭活疫苗主要依靠产生抗HA抗体而提供保护，然而HA基因变异频繁，使得疫苗株不能够对流行株产生有效的保护，另外由于灭活疫苗存在免疫剂量大、免疫期短及毒副作用大等诸多问题导致免疫失败常有发生。研究发现类型不同的疫苗在预防流感时有相互补充的免疫加强作用。鉴于灭活疫苗本身存在有缺点，而所以通过研究各种疫苗的优缺点，取长补短，可实现免疫效果的最佳化。核酸疫苗由于其既能够诱导体液免疫反应又能诱导细胞免疫反应，因此得到了广泛的研究。

    在这篇文章中中，研究人员以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板，通过RT-PCR技术扩增出HA基因，并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中，成功构建重组表达质粒pCI-HA，瞬时转染vero E6和293T细胞，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay ，IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, iIFA)和蛋白免疫印迹（Western blot，WB）实验证明，HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后，ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度，并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。

    HA蛋白是流感病毒感染宿主细胞的主要致病因子，也是流感病毒的重要抗原，可以刺激机体产生中和保护抗体，也可以诱导机体产生细胞免疫反应．但是常规SI灭活疫苗和弱毒疫苗免疫后，利用血清学方法不能区分出免疫动物和自然感染动物，干扰病毒流行病学监测。DNA疫苗是利用病原的保护性抗原构建真核表达质粒，再将质粒DNA导入机体细胞，使外源基因借助于机体内源性表达系统表达并提呈给宿主免疫系统，诱导产生特异性的免疫应答反应，从而达到免疫目地的新型基因工程疫苗。DNA免疫还具有高度安全稳定，不受宿主种属特性及免疫状态限制和不干扰血清学调查的特点，而且DNA接种还被认为有可能是消灭大流行性流感病毒的一种快速有效方法。